根據所附使用手冊，使用小鼠Ig-引子集(由Novagen製造)選殖抗體cDNA之可變區。 將一百奈克人類CSF-1R-Fc蛋白質塗佈於96孔ELISA盤上，且再用PBS洗滌該盤。 將自1×10-12M至1×10-8M的AB21 mAb抗體之連續稀釋液添加至該盤中，並在37℃下培育該盤1小時。 1小時之後，添加3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺並讀取OD450。 使用抗體之OD讀數及濃度，使用GraphPad Prism 5製作多重散點圖。 本發明之一些實施例係關於用於治療發炎性/免疫性疾病之方法。
- 腱鞘鉅細胞瘤常常發生在手指，手術時腱鞘鉅細胞瘤經常會沿着肌腱和骨頭包繞性生長，因此切口經常比較長或者不規則，手術之後切口容易發生皮膚壞死，應該注意每天換藥，觀察皮膚癒合情況，如…
- 該可變結構域可具有任何尺寸或胺基酸組成且一般將包含至少一個CDR，該至少一個CDR與一或多個構架序列相鄰或同框。
- 藉由40%硫酸銨及蛋白質A管柱(Montage抗體純化套組，Millipore)進一步純化抗體。
- 經由ELISA或BIAcore分析確定本發明之抗體與CSF-1R具有特異性結合。
- 根據所附使用手冊，使用小鼠Ig-引子集(由Novagen製造)選殖抗體cDNA之可變區。
VH及VL區可進一步細分成多個互補決定區，間雜有構架區。 每個VH及VL由三個CDR及四個FR構成，自胺基末端至羧基末端按以下順序佈置：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。 在本發明之不同實施例中，抗CSF-1R抗體(或其抗原結合片段)之FR可與人類生殖系序列一致或可經天然或人工修飾。 胺基酸共同序列可以基於兩個或兩個以上CDR之並排分析來確定。 抗CSF-lR AB21 mAb(30 mpk，每週一次)對RKO腫瘤生長之抑制作用類似於派姆單抗(5 mpk，兩週一次)之作用。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘鉅細胞瘤是什麼原因引起的
腱鞘巨細胞瘤的手術治療並不困難，但是手術後的復健相當重要！ 另外，因為有較高的手術後復發機會，因此可能需搭配低劑量的放射線治療。 在口服藥的部分，臺灣目前有Pexidartinib臨牀試驗在進行，期待未來新的口服藥能在臺灣能早日核可，幫助腫瘤切除手術會導致嚴重後遺症或功能受損之晚期腱鞘巨細胞瘤患者。 臺北榮總骨骼肌肉腫瘤治療暨研究中心修正了這個傳統的方式，將第一、第二次手術合併在一起，手術後不用石膏固定，反而在手術後隔天開始積極的復健運動。 根據我們的研究結果，這個方法可以使病患得到更好的手術後功能恢復目前已被認可為國際上治療彌漫型的腱鞘巨細胞瘤的參考。
- 林家麟說明，腱鞘巨細胞瘤的治療為仔細的手術切除，去除的常見原因包括：美容、功能喪失和神經受壓引起的神經病症狀。
- 將盤中內含物輕敲至凹槽中並用300 µl洗滌緩衝液洗滌孔三次。
- 此等結果清楚地展示，本發明抗體將可用於在臨牀上使用以治療癌症。
- 另一個腱鞘瘤即腱鞘纖維瘤fibroma of the tendon sheath可能為腱鞘巨細胞的亞型也侵犯手指和手的屈側肌腱，臨牀形態與巨細胞腱鞘瘤相同，平均發病年齡為30歲，較巨細胞腱鞘瘤發病年齡輕。
- 熟習此項技術者將能夠在不進行過度實驗之情況下鑑別出此類量。
- 腱鞘鉅細胞瘤（也稱爲“鉅細胞滑膜瘤”，“侷限性結節性腱鞘炎”和“色素絨毛結節性滑膜炎”），是手部第二常見腫物（最常見的…
- 此瘤之另一亞型稱腱鞘纖維瘤，臨牀上兩者不能區別。
病理學方面，可以見到會有許多的絨毛、乳狀突起與結節性的特徵的滑膜結構，因此過去命名為色素絨毛結節性滑膜炎。 大多數的單一顆型腱鞘巨細胞瘤多發生在關節腔外，治療上比較容易，手術完整切除即可。 瘤內細胞由組織細胞樣單核細胞，成骨樣多核巨細胞，黃色瘤細胞，慢性炎癥性細胞，含鐵血黃素巨噬細胞和膠原化基質以不同比例混合組成。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘巨細胞瘤
因此，中和抗體經由CSF-1R信號傳導靶向TAM成為治療腫瘤及發炎性/免疫性疾病的一個引人注目之策略。 為了確定在小鼠抗體人類化之後的親和力變化，分別藉由核苷酸合成方法直接產生人類化輕鏈及人類化重鏈之可變區。 將小鼠可變區、人類化區及人類Fc嵌合體抗體表現載體pTCAE8-AB21引入宿主細胞中以製備表現重組抗體之細胞。 使用Free Style™ 293細胞(由Invitrogen製造)作為宿主細胞以進行表現。 藉由聚乙亞胺，根據所附使用手冊(由Invitrogen製造)將載體引入宿主細胞中。 藉由限制酶使約37 µg抗體表現載體線性化，將基因引入3×107個細胞中。
在其他實施例中，一或多個構架及/或CDR殘基可突變成不同生殖系序列(亦即，不同於最初得到抗體之生殖系序列的生殖系序列)之相應殘基。 腱鞘巨細胞瘤2025 如本文所使用，術語抗體之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」及類似表述包括特異性結合抗原以形成複合物的任何天然存在的、可以酶法獲得的、合成的或經基因工程改造的多肽或糖蛋白。 抗體之抗原結合片段可使用任何適合的標準技術，諸如蛋白水解消化或重組基因工程改造技術，由完整抗體分子得到。
腱鞘巨細胞瘤: 臨牀特點
如圖3中所示，本發明之mAb AB21顯示阻斷CSF-1/CSF-1R相互作用之特異性且強效的活性。 此等結果證實，本發明抗體將有效抑制由CSF-1及CSF-1R信號傳導介導的腫瘤相關巨噬細胞之增殖及分化。 本發明之一些實施例係關於抗CSF-1R抗體或其抗原結合片段之用途，其係用於診斷、評估及治療與CSF-1R、CSF-1及/或IL-34或其異常表現相關之疾病或病症。 腱鞘巨細胞瘤2025 主題抗體係用於治療或預防腫瘤及/或治療或預防自體免疫性及/或發炎性疾病等疾病。 抗人類CSF-1R抗體及其用途 本發明大體上係關於可特異性中和人類CSF-1R之抗體以及其使用及製備方法。 特定言之，本發明係關於可具有減少巨噬細胞之作用的抗體、此類抗體之製備及其在治療與異常巨噬細胞增殖相關之疾病，諸如腫瘤方面的用途。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘鉅細胞瘤手術怎麼做
添加每孔100 µl含一級抗體之阻斷緩衝液(1 µg/mL RG7155、0.25 µg/mL IMC-CS4)並在37℃下培育1小時。 使用2A6作為陰性對照抗體，該抗體不識別人類CSF-1R。 添加每孔100 µl含4倍連續稀釋之競爭抗體的阻斷緩衝液(最高濃度係2 µg/ml)並在37℃下培育1小時。 添加每孔100 µl受質溶液並在室溫下反應20分鐘，且用100 µl之1 N HCl停止反應。 量測盤之450 nm吸光度並經由GraphPad Prism 5計算EC50值。 為了闡明mAb AB21之結合抗原決定基，對mAb AB21與藉由單點突變或片段突變產生之不同CSF-1R ECD突變體之結合執行ELISA分析。
腱鞘巨細胞瘤: 臨牀表現
一種用於治療由CSF-1R、CSF-1及/或IL-34介導之疾病的醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含如請求項1至8中任一項之抗體或其抗原結合片段，及醫藥學上可接受之載劑。 在含有15% FCS之IMDM培養基(由Gibco製造)中培養融合瘤。 在細胞數量達到約10×106個/毫升之後，藉由離心收集細胞，且接著根據使用手冊，添加TRIzol®(由Invitrogen製造)以提取總RNA。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘鉅細胞瘤怎麼治
活體內功效分析：在IL-6 NOG小鼠之結腸直腸癌RKO異種移植模型中研究抗CSF-lR抗體之腫瘤生長抑制作用。 由於抗人類CSF-1R抗體AB21無法識別小鼠CSF-1R，故使用移入人類PBMC之免疫缺陷小鼠IL-6 NOG小鼠進行功效研究。 藉由以下描述之方法製備含有人類IgG抗體之培養物上清液。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘鉅細胞瘤是什麼
如圖6中所示，mAb AB21可以劑量依賴性方式抑制CSF-1R及AKT之磷酸化，AKT係在CSF-1R信號傳導下游之激酶。 此等結果指示，本發明之抗體實際上可抑制CSF-1R介導之信號傳導。 因此，本發明之抗體應可用於治療由CSF-1R介導之疾病。 抗CSF-1R單株抗體AB21結合至與臨牀試驗中的其他抗CSF-1R單株抗體所結合不同的抗原決定基。 本發明之一些實施例係關於用於治療由CSF-1R介導之疾病的方法，此類疾病可包括癌症。 為展示本發明抗體在治療癌症方面之效用，使用鼠類模型。
腱鞘巨細胞瘤: 手術切除腫瘤！免於復發機會
雖然最理想的方面是盡量將腫瘤切除乾淨，但是仍要追求一個平衡。 因為切除的越乾淨，雖然比較不會復發，但相對而言併發症就會增加。 腱鞘巨細胞瘤 腱鞘巨細胞瘤2025 但如果保持更多一些重要機構，可以降低併發症的發生，但是同樣的復發率就會增加。 因此，為了減少手術之後的復發機會，目前全球的共識是在手術之後大約四到六週，給予病患低劑量的放射線治療。 在我們的臨牀觀察中，我們可以發現經由這樣『併行』的治療方式，腫瘤可能會在手術後六至十二個月內稍微繼續生長，但最後生長便會停止、甚至腫瘤漸漸的消掉。 相當少的病患，會因為持續的症狀而需要進行第二次的腫瘤切除手術。
腱鞘巨細胞瘤: 治療
最典型的臨牀發現，便是醫師可以從病患的膝蓋中，抽出黑紅色的血液狀關節液。 另外，雖然這個腫瘤的名稱中有『巨細胞瘤』，但臨牀表現與我們骨腫瘤中的『巨細胞瘤』是完全不同的。 腱鞘巨細胞瘤 腱鞘巨細胞瘤（或又稱色素絨毛結節性滑膜炎）是一種偶而可見的良性軟組織腫瘤，一般多發生在膝蓋，可以分為單顆型與彌漫型兩種。 彌漫型的色素絨毛結節性滑膜炎一般處理起來比較棘手，常常無法手術完全清除乾淨，而會留下症狀不一的後遺症。
腱鞘巨細胞瘤: 手上出現硬塊、腫瘤可能是「腱鞘巨細胞瘤」！一症狀出現要當心
研究顯示大約有76%腱鞘巨細胞瘤生成和CSF1基因的轉位有關。 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO：2、10、11、12或13之序列，且其中該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO：3、14、15或16之序列。 根據本發明之實施例的抗體可以為全長的(例如IgG1或IgG4抗體)，或可僅包含其抗原結合片段/部分(例如Fab、F(ab’)2或scFv片段)，且可視需要經修飾以改善功能。 瀰漫型腱鞘巨細胞會在關節腔中散生生長，黏附在重要的韌帶、軟骨與肌腱上。 治療上較為不易，常常無法藉由手術完全清除，因此手術後會殘留腫瘤且復發機會相當高。 林家麟說明，腱鞘巨細胞瘤的治療為仔細的手術切除，去除的常見原因包括：美容、功能喪失和神經受壓引起的神經病症狀。
腱鞘鉅細胞瘤一般分爲侷限性和瀰漫性，侷限性的通常病變僅侷限於手指或腳趾，男女比例爲1：2。 發病年齡在20-40歲，大多數病例是無痛性的生長緩慢的結節，一般結節直徑不超過三釐米，局部切除後有10%的病例會出現局部復發。 而瀰漫性腱鞘鉅細胞瘤一般累及大關節，以女性多見，多爲年輕人。 病人會有疼痛、腫脹、運動受限，病史一般較長，關節會出現腫脹、溫度升高。 瀰漫型滑膜炎預後良好，但病變應將滑膜全部切除，有大約四分之一的病人可以出現復發。 其他常見的位置，包括髖關節（約20％）與踝關節（10%），少部分會發生在顳顎關節 與脊椎。
熟習此項技術者將能夠在不進行過度實驗之情況下鑑別出此類量。 為評價抗人類CSF-1R抗體AB21 mAb之結合親和力，使融合瘤在含有15%胎牛血清之IMDM中生長。 培養一週之後，收集1×106個細胞，用PBS洗滌，使其再懸浮於200 µl RPMI培養基中，並藉由IP注射將其注射至嚴重聯合免疫缺陷小鼠體內。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘鉅細胞瘤會惡變嗎
男性與女性發生的比率是差不多的，但女性稍微多一些。 四、另一個腱鞘瘤即腱鞘纖維瘤可能為腱鞘巨細胞的亞型也侵犯手指和手的屈側肌腱，臨牀形態與巨細胞腱鞘瘤相同，平均發病年齡為30歲，較巨細胞腱鞘瘤發病年齡輕。 腱鞘巨細胞瘤2025 腱鞘鉅細胞瘤需要治療，如果不做治療，通常病情會加重，有破壞局部結構等風險發生。 對於腱鞘鉅細胞瘤，如果是早期發現，病竈較侷限，需要做治療，主要是早期徹底切除，通常可以避免復發。
家麟舉例近期發生的一個臨牀個案：患者只有在手腕有一個小小的硬塊不太痛，但經檢查後，腫瘤已經跑到關節裡面。 進行手術發現關節囊侵犯，腕骨軟骨有磨損，經手術後尚未再復發。 在X光的影像之中，發生在膝關節之腱鞘巨細胞瘤可以見到軟組織腫脹的現象，較少見到骨骼組織的破壞。 但若是發生在髖關節附近的腱鞘巨細胞瘤，則常會見到合併骨骼結構的破壞，而有時不易與缺血性股骨頭壞死做區分。 腱鞘巨細胞瘤（色素絨毛結節性滑膜炎），好發在青壯年時期，平均年齡約35歲。
腱鞘巨細胞瘤: 腱鞘鉅細胞瘤怎麼治
在具有與VL結構域締合之VH結構域的抗原結合片段中，VH及VL結構域可相對於彼此以任何適合佈置定位。 舉例而言，可變區可為二聚的且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚體。 或者，抗體之抗原結合片段可含有單體VH或VL結構域。 在一些實施例中，本發明之抗體(或其結合片段)藉由與針對第二目標之另一特定結合結構域綴合而形成雙特異性或多特異性抗體之一部分。
與完整抗體分子相同，抗原結合片段可為單特異性或多特異性(例如雙特異性)的。 抗體之多特異性抗原結合片段典型地將包含至少兩個不同的可變結構域，其中每個可變結構域能夠與獨立抗原或與同一抗原上之不同抗原決定基特異性結合。 可以使用此項技術中可用之常規技術使任何多特異性抗體形式，包括本文所揭示之例示性雙特異性抗體形式適合用於本發明抗體之抗原結合片段情形。 在某些實施例中，抗體之抗原結合片段可含有共價連接到至少一個恆定結構域之至少一個可變結構域。 在包括以上所列例示性組態中之任一種在內的可變結構域及恆定結構域之任何組態中，可變結構域及恆定結構域可彼此直接連接或可藉由完整或部分鉸鏈或連接子區連接。
腱鞘巨細胞瘤: 治療
在本發明之一些實施例中，特異性結合人類CSF-1R之抗體係完整抗體、Fab片段、F(ab’)2片段或ScFv片段。 手腕上突然長出一塊小硬塊，雖然不太痛但越長越大，到醫院檢查才發現是「腱鞘巨細胞瘤」，醫師發現腫瘤已經跑到關節裡面，連腕骨軟骨都有磨損，再拖久一點可能會引起其他併發症，好在緊急手術切除後並沒有再復發。 腱鞘巨細胞瘤的皮損呈堅實性無痛性腫塊，生長緩慢，通常小於3cm，發生於手指和手部，足趾部少見。