根據中央研究院生物醫學科學研究所實驗動物照護及使用委員會所訂之程序及指南進行動物實驗。 將微管蛋白及秋水仙素與各種濃度的AS1712、諾考達唑、或敏克瘤在80mM PIPES、2mM MgCl2、0.5mM EGTA、pH 6.9中以37℃培養1小時。 使用Infinite M200 plate reader記錄螢光強度(激發及放光波長分別於365及435nm處)。 從一名分化不良腺癌的64歲男性患者中分離出CL1-0細胞。
在某些實施例中，烷基具有1到8個碳原子(「C1-8烷基」)。 在某些實施例中，烷基具有1到7個碳原子(「C1-7烷基」)。 在某些實施例中，烷基具有1到6個碳原子(「C1-6烷基」)。 在某些實施例中，烷基具有1到5個碳原子(「C1-5烷基」)。 在某些實施例中，烷基具有1到4個碳原子(「C1-4烷基」)。 在某些實施例中，烷基具有1到3個碳原子(「C1-3烷基」)。
舌下癌: 治療
於某些實施例中，該一或多種抗微管藥物包括紫杉醇或長春花生物鹼。 於某些實施例中，該癌症對紫杉醇及/或長春花生物鹼有抗藥性。 於某些實施例中，該紫杉醇為太平洋紫杉醇及/或伊沙匹隆。 於某些實施例中，該長春花生物鹼為敏克瘤或敏畢瘤。 於某些實施例中，該癌症對太平洋紫杉醇及敏克瘤有抗藥性。
適用於口服投予的固體劑型包含膠囊、錠劑、丸劑、粉末及顆粒。 舌下癌 舌下癌2025 用以口服及非口服投予之液體劑型包含醫藥上可接受的乳劑、微乳劑、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。 除了活性成分，液體劑型亦可包含相關領域慣用之惰性稀釋劑，例如，水或其他溶劑、增溶劑及乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇、脫水山梨醇之脂肪酸酯及其混合物。
舌下癌: 治療と生活
在某些實施方式中，環烷基是未經取代之C3-10環烷基。 在某些實施方式中，環烷基是經取代之C3-10環烷基。 舌下癌 本發明之另一態樣係關於套組，其包含具有本文所述化合物或其醫藥組成物之容器。 本文所述之套組可包含單劑或多劑之化合物或醫藥組成物。
- Β微管蛋白藥物結合位點的結構改變突變或構形改變之β-微管蛋白同種型的表達可能會干擾MTA與其在β-微管蛋白上結合位點之間的相互作用，因而導致治療失敗。
- 於某些實施例中，本發明所使用之烷基、烯基及炔基含有1-20個脂肪族碳原子。
- 羅丹明排出測定及免疫墨點研究排除了AS1712直接抑制P-gp泵活性或P-gp表達的可能性，其支持了AS1712不是P-gp受質的假設。
- 於某些實施例中，本文所述之化合物或醫藥組成物可投予至所需患者，其中該患者之癌症(例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、頭部癌、頸部癌、頭頸癌或血癌)對至少一醫藥劑有抗藥性(例如，對一或多種抗微管藥物治療具抗性之癌症(例如，與P-醣蛋白(P-gp)過度表達相關之對多種藥物有抗性之癌症))。
- 本發明領域具有通常知識者當可理解，本文中之「脂肪族」意涵包括，但並不限於，烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基及和環炔基基團。
- 於某些實施例中，至少一R1為鹵素(例如F、Cl、Br、或I)。
- 於某些實施例中，該疾病為癌症，舉例包括肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、頭部癌、頸部癌、頭頸癌或血癌。
- 「雜芳基」亦包括雜芳環(如上文所定義)與一個或多個芳基稠合之環狀系統，其連接點是在芳環或雜芳環上，在這種情況下，環成員編號是指定稠合(芳基/雜芳基)環系統中的環成員編號。
觀察到AS1712處理會破壞紡錘絲組織即表示，該處理可能干擾動態微管結合及/或解離。 因此，進行免疫螢光分析，以檢測經AS1712處理之CL1-0、H1975及HFB細胞中微管網絡的狀態。 舌下癌2025 AS1712處理CL1-0及H1975細胞導致其微管去聚合化(圖6A)，而此等處理 對HFB細胞中的微管則僅有很小的影響(圖7)。
舌下癌: 治療
利用蛋白質限制水解分析進一步表徵微管蛋白上的AS1712-結合位點。 對於微管去穩定劑，已知有兩種不同的微管蛋白結合位點：長春花鹼位點及秋水仙素位點。 當藥物與微管蛋白結合時，其會誘導構形變化，此構形變化可透過胰蛋白酶限制水解 舌下癌2025 舌下癌2025 分析進行探測(圖9C及9D)。 在胰蛋白酶限制水解後，秋水仙素-位點藥物諾考達唑會導致β-微管蛋白解構並產生增加量的βcol。
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互變異構物的確切比例取決於幾個因素，包括溫度、溶劑和酸鹼值。 可由酸或鹼催化產生互變異構化(即，該反應提供一對互變異構體)。 示例性之互變異構化包括酮-至-烯醇、醯胺-至-醯亞胺、內醯胺-至-內醯亞胺、烯胺-至-亞胺、及烯胺-至-(另一種烯胺)之間的互變異構化。 除非另有所指，否則在價數允許的情況下，本文所述之原子、基團或基可為未經取代或經取代。 「芳烷基」是烷基與芳基之子集合，其係指被視情況取代之芳基所取代之視情況取代的烷基。 癌症是全球第二大最常見的死亡原因，而肺癌是癌症相關死亡的主因。
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含有一個雜原子之示例性6員雜芳基包含，但不限於，吡啶基。 含有兩個雜原子之示例性6員雜芳基包含，但不限於，噠嗪基、嘧啶基及吡嗪基。 含有3或4個雜原子之示例性6員雜芳基分別包含，但不限於，三嗪基及四嗪基。 含有一個雜原子之示例性7員雜芳基包含，但不限於，氮庚因基、氧庚因基、硫庚因基。
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接著，將細胞與一指定化合物重懸於加熱至37℃的培養基中，並於相同溫度之水浴中培養1小時，以進行排出測定。 透過FACSCanto流式細胞技術以定量螢光強度。 處理後，將細胞用胰蛋白酶作用並在冰冷的70%乙醇中固定過夜。
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除了惰性稀 釋劑，口服組成物可包含佐劑，例如潤濕劑、乳化劑及懸浮劑、甜味劑、調味劑及香味劑。 舌下癌 在某些非口服投予之實施方式中，其將本文所述之共軛物與增溶劑混合，例如Cremophor®、酒精、油、改性油、二醇、聚山梨醇酯、環糊精、聚合物及其混合物。 於某些實施例中，本發明之組成物被包覆於載體媒介物中，該載體媒介物可以是剛性液胞、彈性液胞、單層液胞、多層液胞、微脂粒、非離子體，前非離子體、傳遞體(transfersomes®)、醇脂體、L-595-PEG-8-L液胞、奈米乳劑、奈米微脂粒、奈米顆粒或其組合。 術語「抗微管藥物(microtubule-targeting agent)」或「MTA」是指靶向並干擾癌細胞微管、調節癌細胞微管之動力學、並因而導致有絲分裂停滯及隨後細胞凋亡之藥物。 示例性抗微管藥物包括，但不限於，微管穩定劑及去穩定劑。 示例性微管穩定劑包括，但不限於，紫杉醇及長春花生物鹼。
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本申請案包含不同的核准專利、公開專利申請案、期刊文獻及其他公開文件，該些文件在此一併納入全文以供參照。 若參照文獻及本案說明書有任何衝突矛盾之處，應以本案說明書揭示內容為準。 此外，若本發明之特定實施方式落入前案的揭示範圍，可由一或多項請求項中明確排除該內容。 基於該些實施方式應視為本發明所屬技術領域具有通常知識者所熟知的內容，即使 本文未明確排除，亦可排除該些內容。 舌下癌 無論是否與前案的揭示內容相關，本案請求項可基於任何理由排除本發明的特定實施方式。 除非另有所指，否則在本文及申請專利範圍中諸如「一」及「該」等詞彙均涵蓋一或多個。
舌下癌: 治療
舉例來說，Berge et al.於J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1-19中詳細描述之醫藥上可接受之鹽，其併於此做為標的參考且為參考目的。 本發明化合物之醫藥上可接受 之鹽包括衍生自合適無機及有機酸及鹼的鹽類。 醫藥上可接受、無毒酸加成鹽為胺基的鹽類，其係由胺基與無機酸(如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及過氯酸)、或與有機酸(如乙酸、草酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸)、或通過使用本領域中已知的其它方法(如離子交換法)而形成。 衍生自適當鹼之鹽包括鹼金屬、鹼土金屬、銨及N+(C1-4烷基)4 -的鹽。
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「部分不飽和」的環狀系統意在涵蓋具有多個不飽和部位的環，但不包括芳香基(例如，芳基或雜芳基)。 同樣地，「飽和」是指不含有雙鍵或三鍵的基團，即，皆為單鍵。 說明性之脂肪族基團包含，但不限於，例如，甲基、乙基、正丙基、異丙基、環丙基、-CH2-環丙基、乙烯基、丙烯基、正丁基、二級丁基、異 丁基、三級丁基、環丁基、-CH2-環丁基、正戊基、二級戊基、異戊基、三級戊基、環戊基、-CH2-環戊基、正己基、二級己基、環己基、-CH2-環己基及其類似者，其又可帶有一或多個取代基。 烯基包含，但不限於，例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁-1-烯基(1-methyl-2-buten-1-yl)及其類似者。 代表性的炔基包含，但不限於，乙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丙炔基及其類似者。 舌下癌 收集KBtax細胞(2.5×105/測試)，並在含有5mM羅丹明之低溫培養基中在冰上放置1小時。
於某些實施例中，至少一R2為 -ORD1、-N2、或-SRD1，且RD1如本文所定義。 於一些實施例中，至少一R2可為-ORD1(例如，-OH或-OMe)。 於一些實施例中，至少一R2可為-N2(例如，-NH2或-NMe2)。 於一些實施例中，至少一R2可為-SRD1(例如，-SH或-SMe)。 如請求項40所述之化合物用以製備抑制細胞、組織、生物樣本或所需個體中癌細胞微管聚合之醫藥組成物的用途，其中該化合物係結合β-微管蛋白之秋水仙素結合袋點。 於某些實施例中，其提供抑制所需個體之癌細胞微管聚合之方法，該方法包括對該個體投予一治療有效量之式化合物或其醫藥上可接受之鹽、共晶體、互變異構物、立體異構物、溶劑合物、水合物、多形體、同位素富集衍生物、或前驅藥、或本文所述之醫藥組成物。
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使用Discovery Studio(Accelrys Inc.)進行分子嵌合，以評估AS1712於微管蛋白之秋水仙素結合位點中之可能結合模式。 使用Discovery Studio中之Prepare Protein protocol(其對結構進行質子化並插入missing loop區域)，以準備初始的晶體結構。 利用Discovery Studio中之CDOCKER docking protocol，基於格子為基礎(grid-based)之分子嵌合方法以及將結合能最小化之CHARMm力場來進行嵌合。