数据标准化至非靶shRNA转导的细胞所测得的水平(设为100％)。 通过实时PCR检测到，克隆1中转录本的mRNA水平下降至38％且克隆2中下降至21％。 对于克隆1和克隆2，hCGβ的水平下降(分别为下降至对照的20.45％和对照的9.09％)。
通过特异性hCGβELISA测量是否存在分泌至培养基的游离hCGβ蛋白及其量。 在剩余的癌细胞系(T24、PC-3、LN-CAP、C2238)中，没有可用该方法在介质中检测到的hCGβ(小于0.5ng/106个细胞/24h)。 癌细胞系中CGB、CGB5、7、8 mRNA的表达发生变化但在大多数情况中小于胎盘中观察到的表达水平的1％。 根据针对DNA-500试剂盒(岛津公司)的生产商说明书通过微芯片电泳系统MCE202 MultiNA(岛津公司)来检测实时PCR产物。 基于25bp DNA梯标(英杰公司)的分离来估计DNA产物的长度。 应用MultiNA电芯片系统可通过MultiNA Viewer软件非常精确地估计qPCR产物的大小。
这些核苷酸可位于“点”中，连同多种相同序列的其他核苷酸。 CGB1和/或CGB2的表达产物可用于本发明的方法中。 因此，在本发明的另一个方面中，提供了用于检查癌性病症(优选上皮癌)的CGB1和/或CGB2的表达产物。 2.如权利要求1所述的方法，所述CGB2和/或CGB1基因的表达产物是CGB2和/或CGB1基因的230bp剪接变体。 CGB1和/或CGB2(主要是CGB2)的表达与癌症转移相关hCGβ蛋白(CMAhCGβ)的分泌特异性相关；而CGB基因(CGB3、CGB5、CGB7和CGB8mRNA)的检测不相关。 因此，CGB1和/或CGB2mRNA检测是转移性和侵略性癌症表型的诊断。
可通过检测CGB2和/或CGB1基因的表达产物来显示CGB2和/或CGB1基因的表达。 “表达产物”可以是核酸分子(如mRNA)或翻译自核酸序列的氨基酸序列(如肽、前蛋白或蛋白质)。 来自基因CGB1/2的mRNA在三种膀胱癌细胞系的两种中检测到；SCaBER和RT112显示与足月胎盘相比显著较高的转录本水平，两者都高128倍。 与胎盘对照样品相比，乳腺癌细胞系C2335显示高32倍的CGB1/2mRNA表达(参见表1)。
后续的测序研究显示，基因CGB7和CGB3还具有等位基因变体，分别是CGB6和CGB9。 CGB3现在简称为CGB且可能是LHβ基因附近产生的基因簇中第一个真CGB基因。 脸癌 14.如权利要求9所述的试剂盒，其还包括用于检测和/或测量CGB3、CGB5、CGB7和/或CGB8表达的试剂。 6B：RNA沉默对于SCaBER细胞活力的影响–显示递增浓度的siRNA(nmol/l)和活细胞的相对水平。 与使用靶向CGB基因的shRNA稳定转染的SCaBER克隆相比，使用非靶shRNA对照载体转染后扩增对照克隆SCaBER基因表达。
- 针对重组hCGβ(西格玛公司)(范围为50pg/l至0.5pg/l)的标准曲线校正试验，其已针对hCGβ的第一国际参比制备物(批次75/551；NIBSC公司，英国波特斯巴)校正。
- 或者，可使用与CGB基因(CGB3、CGB5、CGB7和/或CGB8)的转录产物杂交的探针来测定是否存在CGB基因(CGB3、CGB5、CGB7和/或CGB8)的扩增的转录产物。
- 适用于胃肠外给药的药物制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及使得制剂与指定接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌混悬液，其可包含助悬剂和增稠剂。
- 我们还检查了培养物中的细胞活力是否能在沉默后改变以确定hCGβ分泌对于存活率的影响。
- 可通过例如快速高压静脉注射(“水力疗法”)或受体介导的系统性递送来实现系统性递送。
- 与使用靶向CGB基因的shRNA稳定转染的SCaBER克隆相比，使用非靶shRNA对照载体转染后扩增对照克隆SCaBER基因表达。
- 存在CGB1和/或CGB2基因的表达产物指示分泌hCGβ的癌症。
表面处生成的电场是一种控制表面处核苷酸的吸引和排斥的有用方法(Asanov1998；Sosnowski1997)。 最初完成LH-CGβ/基因簇的完整克隆后，其他研究表明存在两类生成hCGβ的基因，称作类型I和II。 类型I指似乎导致合成117位处具有丙氨酸残基的hCGβ蛋白的CGB7的基因产物且类型II指CGB、CGB5和CGB8的基因产物(其在117位处均编码天冬氨酸残基)。 脸癌2025 脸癌2025 这些研究形成了JMBidart美国专利号6,194,154的基础。 最近，其他关于乳腺癌、肺癌和肾癌的研究都显示CGB7以相对低水平表达，这与这些最初所声称的不一致。
对生成的序列进行Blast序列分析以鉴定其与NCBI基因数据库中保存的那些序列的同源性。 此外，表面或其上的颗粒可携带电荷或是电偏好的或可经加热以控制测序过程(Hamad-Schifferli,2002)。 带电表面特别适用于避免表面上核苷酸的非特异性相互作用。 脸癌2025 适当的表面包衣包括聚乙胺(参见Braslavsky,2003)和可获自VBC基因组公司(奥地利)的DNA结合载玻片。
所有合成、杂交和清洗步骤都可在生产商提供的芯片的微流体通道内进行。 术语“抗体”在本文中指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有特异性结合翻译自CG基因的前蛋白或蛋白质的结合位点的分子，其可以是天然的或部分或完全合成的。 该术语还涵盖任何具有特定结合结构域的多肽或蛋白质，所述结合结构域是(或者同源于)抗体结合结构域。
该捕获可以通过单链寡核苷酸与单链靶标或双链靶标的单链区域的杂交来完成。 脸癌2025 或者，多核苷酸或表面固定的捕获探针可包含粘性末端或两者都可具有粘性末端。 或者，可通过包括针对胸腺嘧啶残基的补骨脂素部分和使用UV光交联来介导永久固定。 本发明中，术语“阵列”指表面上一定模式的一种或多种核苷酸的空间上限定的排列。
针对对照达到的光学密度(设为100％)标准化数据并表达为细胞数目变化百分比。 HCGβ基因簇被分为两类基因：CGB、CGB5、7、8和CGB1/2，通过使用序列特异性引物我们单独地扩增基因以定量表达水平。 似乎没有产物来源于基因组DNA，引物没有扩增到分别对应于481或约629bp的预测产物(含有整个内含子序列)。 将板在37℃下在具有95％空气、5％CO2的潮湿的气氛中孵育1-4小时直至显色并随后在Fluostar OPTIMA(BMG实验室科技公司，英国爱斯勃雷)上在490nm处测量吸光度。 HCGβ基因簇被分为两类基因：CGB、CGB 脸癌2025 5、7、8和CGB 1/2，通过使用序列特异性引物我们单独地扩增基因以定量表达水平。
这里使用的标准品是重组hCGβ(西格玛公司)，其针对于hCGβ的第一国际参比制备物(NIBSC公司，英国波特斯巴)进行校正(浓度范围为0.5ng/ml至50ng/ml)。 收集来自75cm2烧瓶上生长的融合细胞培养物的介质并测试以估计标准化至1×106个细胞的分泌的蛋白质的量。 与胎盘对照样品相比，乳腺癌细胞系C2335显示高32倍的CGB1/2 mRNA表达(参见表1)。 为计算CGB基因的相对量，我们应用Livak和Schmittgen所述的ΔΔCp方法。 检查的癌细胞系中CGB1/2和CGB、CGB5、CGB7、CGB8的转录水平在其管家基因GAPDH含量的基础上标准化并相对于胎盘组织中的基因表达(校正物)进行计算。 最终结果表示为相对于校正物基因表达水平(等于1.0)的CGB表达中的N倍差异。
包括非特异性siRNA靶向的增强型绿色荧光蛋白作为转染应答对照。 阴性对照是使用转染试剂(CodeBreakerTMsiRNA；普洛麦格公司)但不使用任何siRNA处理的细胞。 SiRNA对照转染后，膀胱癌细胞的分泌的hCGβ蛋白水平范围是3-4.6pg/l。 SiRNACGB2寡聚双链体使分泌下降对照的96％而CGB8寡聚双链体使分泌下降对照的42％。 在所有浓度下，我们都观察到siRNA双链体有效地抑制CGB表达(图6A)。 我们还检查了培养物中的细胞活力是否能在沉默后改变以确定hCGβ分泌对于存活率的影响。
对照克隆对应于Cp为16.44，CGB靶向的克隆的最低Cp(23.95)对应于SCaBER克隆1且最高Cp(27.71)对应于SCaBER克隆2。 SNAR-G位于基因CGB1和-2的外显子1的上游区域且显示为沿基因线较小黑色盒。 本发明的组合物可以采用任何合适的给药途径，例如通过口服(包括经颊或舌下)、直肠、鼻、局部(包括经颊、舌下或透皮)、阴道或胃肠道外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)途径。 这类制剂可通过药学领域已知的任何方法制备，例如通过将活性成分与运载体或赋形剂联系。 可通过出于最佳比较目的对齐序列(例如可在第一序列中导入缺口以进行序列的最佳比对)并比较相应位置处的氨基酸残基或核苷酸来测定两条核酸序列或两条氨基酸序列的相同性百分比。
产物231bp对应于CGB1和-2的经计算的特定产物，而引物是25bp以下的条带。 此外，扩增+166bp剪接变体(通过MultiNa软件计算为396bp)。 显示MultiNA分离中上部和下部标记物染料的位置，以及碱基对参比质量标记物的位置。 产物大小中的任何轻微差异都是由不同微芯片上分离中的差异导致的。
这些抗体可来自天然来源，或其可以是部分或完全通过合成生成的。 抗体的示例是免疫球蛋白同种型(例如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)及其同型亚类；包含抗原结合区域的片段(如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd)；和双抗体。 脸癌 用于制备、杂交和分析高密度阵列的完全一体的台式装置可将整个微阵列实验流水线化为一天内完成(例如Geniom one；Baum等)。