在一些實施例中，包括腦內皮細胞、神經元、多巴胺能神經元、室管膜細胞、星狀細胞、小神經膠質細胞、寡樹突神經膠質細胞及許旺細胞之本文所描述之任何神經細胞藉助於靜脈內、脊柱內、腦室內、鞘內、動脈內、肌內、腹膜內、皮下、肌內、腹內、眼內、眼球後及其組合注射至患者中。 在一些實施例中，細胞以推注注射或連續輸注形式注射或沈積。 在某些實施例中，藉由注射至腦部、靠近腦部及其組合來投與神經細胞。 分子治療2025 用於向腦部投與神經細胞之適合部位包括但不限於腦室、側腦室、大腦室、大池、殼核、下橄欖核、海馬區皮質、紋狀體、腦之尾核區及其組合。 在一些實施例中，CRISPR/Cas系統包括Cas蛋白質及能夠將Cas蛋白質引導至目標多核苷酸序列之目標模體並與其雜交的至少一種至兩種核糖核酸。 如本文所用，「蛋白質」及「多肽」可互換使用以指代藉由肽鍵接合之一系列胺基酸殘基(亦即，胺基酸之聚合物)且包括經修飾之胺基酸(例如磷酸化、糖化、糖基化等)及胺基酸類似物。
- 如請求項43之用途，其中藥物包含醫藥調配物，其中所述醫藥調配物包含緩衝劑、等張劑、膨化劑及界面活性劑。
- 移除培養基且細胞經溶解(或若不立即使用，則細胞團塊儲存於-20℃下)。
- 在一些實施例中，步驟a)還包含對人類富潛能幹細胞進行基因修飾以減少MHC I類及MHC II類人類白血球抗原之表現。
- 視應用而定，「一致性」百分比可存在於所比較之序列區上，例如存在於功能域上，或可替代地，存在於待比較之兩個序列之全長上。
在第三十三態樣中，本發明之重組AAV載體包含含SEQ ID NO：40中所闡述之核酸序列之構築體103 bGH polyA。 在第三十二態樣中，本發明之重組AAV載體包含含SEQ ID NO：39中所闡述之核酸序列之構築體103AT 2×MG bGH polyA。 在第三十一態樣中，本發明之重組AAV載體包含含SEQ ID NO：38中所闡述之核酸序列之構築體103AT 2×MG。
分子治療: 免疫系統嚴重或中度受損兒童接種第三劑疫苗的資格
在一些實施例中，該神經細胞群在投與後在該患者中存活及/或發揮功能至少一個月、兩個月、三個月、四個月或更長時間。 分子治療2025 在一些實施例中，在投與該神經細胞群之前、期間及/或之後不向該患者投與免疫抑制劑。 在一些實施例中，該患者需要降低水準之免疫抑制或實質上沒有免疫抑制。
- 由於上文所述且用於非臨床/臨床前研究之AAV5-FVIII-SQ液體調配物展現重組AAV與玻璃及塑膠表面之顯著吸附，在本文中進行操作以產生具有用於人類臨床研究之有利特性的新穎AAV5-FVIII-SQ調配物。
- 在某些實施例中，MHC I或MHC II之表現係藉由靶向及刪除基因體DNA之連續片段藉此減少或消除選自由B2M及CIITA組成之群組的目標基因之表現來調節。
- 在一些實施例中，當使用適合比對演算法最佳比對時，引導序列與其相應目標序列之間的互補程度為約或大於約50%、60%、75%、80%、85%、90%、95%、97.5%、99%或更高。
- 重組FVIII-SQ編碼載體Proto1(顯示於本文圖2A及SEQ ID NO：1中)用於使用如上文所述之基於桿狀病毒/Sf9之表現系統產生重組AAV5FVIII-SQ編碼病毒。
- 在一些實施例中，將寡樹突神經膠質細胞及/或寡樹突神經膠質先驅細胞投與至患有家族性腦中葉硬化症之個體。
- 本文提供自幹細胞活體外分化之多巴胺神經元，其中該多巴胺神經元表現外源性CD47多肽，其中該多巴胺神經元具有降低表現量之B2M及CIITA，且其中該多巴胺神經元展現降低之小神經膠質細胞吞噬作用。
在其他實施例中，DA神經元用於治療或改善神經精神病症之一或多種症狀，諸如注意力缺失過動症、妥瑞氏症候群、精神分裂症、精神病及抑鬱症。 在又其他實施例中，使用DA神經元治療DA神經元受損之患者。 在一些實施例中，DA神經元分化之特徵在於自發節律性動作電位，及在注入去極化電流後具有峰值頻率調適之高頻率動作電位。 所產生多巴胺之含量係藉由量測動作電位在其已達到其最大幅度之一半之點處的寬度(尖峰半最大寬度)而計算。
分子治療: 疫苗安全
在一些實施例中，一或兩種核糖核酸(例如引導RNA)與目標多核苷酸序列之偏移目標模體互補及/或雜交。 在一些實施例中，將低免疫原性DA神經元群自非神經元細胞分離。 在一些實施例中，經分離之低免疫原性DA神經元群在投與之前擴增。
在本發明之一個態樣中，投予藥物導致個體血流中至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或大於10 IU/dl因子VIII蛋白，較佳個體血流中至少約5 IU/dl因子VIII蛋白之表現。 在某些實施例中，投予藥物導致在投予之後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或大於20週，個體血流中至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或大於10 分子治療 IU/dl因子VIII蛋白之表現。 在某些實施例中，包含治療有效量之用於減少出血時間之AAV FVIII病毒的藥物亦包含用於預防及/或治療與投予如上文所述之AAV FVIII病毒相關之任何肝毒性的預防性及/或治療性皮質類固醇。
分子治療: 核酸医薬
編碼功能活性FVIII之基因組之長度較佳為至多7.0kb，長度更佳為至多6.5kb，長度更佳為至多6.0kb，長度更佳為至多5.5kb，長度更佳為至多5.0kb，具有增強的啟動子功能。 一種自幹細胞活體外分化之多巴胺神經元，其中該多巴胺神經元表現外源性CD24多肽，其中該多巴胺神經元具有降低表現量之B2M及CIITA，且其中該多巴胺神經元展現降低之小神經膠質細胞吞噬作用。 一種自幹細胞活體外分化之多巴胺神經元，其中該多巴胺神經元表現外源性CD47多肽，其中該多巴胺神經元具有降低表現量之B2M及CIITA，且其中該多巴胺神經元展現降低之小神經膠質細胞吞噬作用。 一種神經細胞用於治療神經疾病之用途，其包含經分離神經細胞，該經分離神經細胞包含外源性CD24多肽及表現減少之MHC 分子治療2025 I類人類白血球抗原及/或MHC II類人類白血球抗原，其中該經分離神經細胞在向患者投與時逃避免疫識別。 一種神經細胞用於治療神經疾病之用途，其包含經分離神經細胞，該經分離神經細胞包含外源性CD47多肽及表現減少之MHC I類及/或II類人類白血球抗原，其中該細胞在向患者投與時逃避免疫識別。
分子治療: 接種疫苗
在投配時，患者九具有 患者九經繼續之觀測時段用濃度介於10毫克/天至40毫克/天範圍內的皮質類固醇治療性地治療。 治療性皮質類固醇治療在無因子VIII含量之伴隨減小或任何相關嚴重不良事件的情況下將肝毒性相關ALT濃度維持於可接受含量。 患者八如上文所述藉由單次靜脈內灌注投配每公斤體重6E13載體基因組之AAV5-FVIII-SQ。 在投配時，患者八具有 患者八經繼續之觀測時段用濃度介於10毫克/天至40毫克/天範圍內的皮質類固醇預防性地治療。
分子治療: 疫苗超級英雄漫畫
本文提供一種自幹細胞活體外分化之神經元，該神經元表現外源性CD47多肽且表現：i)降低表現量之MHC I類及/或II類人類白血球抗原及/或ii)降低表現量之B2M及/或CIITA，其中該神經元展現降低之小神經膠質細胞吞噬作用。 本發明亦關於在有需要之個體中增加功能FVIII蛋白表現之方法，其包含向個體投予如本文所述之重組AAV FVIII病毒之步驟，所述病毒視情況可如上文所述調配，其中此類投予導致個體血流中功能FVIII蛋白增加之表現或功能FVIII蛋白增加之濃度。 在本發明之一個態樣中，投予步驟導致個體血流中至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10或大於10 IU/dl因子VIII蛋白，較佳個體血流中至少約5 IU/dl因子VIII蛋白之表現。 本發明提供腺相關病毒因子VIII編碼/表現載體及病毒，包括具有高表現活性之AAV FVIII載體及表現全長或截短功能FVIII蛋白之AAV 分子治療2025 FVIII載體。
分子治療: Taxes and tax credits
亦提供一種組合物，其包含本文所描述之該等經分離神經細胞中之任一者之群體。 在一些實施例中，步驟c)中之該等人類神經細胞之該分析包含藉由Elispot、ELISA、FACS、PCR或質譜細胞測量術分析該低免疫原性表型。 分子治療 在若干實施例中，該神經細胞群以比親本富潛能幹細胞(例如未經修飾之富潛能幹細胞)或未經修飾之神經細胞中更高之含量表現CD47。
分子治療: 接種疫苗
在一個態樣中，調配物在約5 分子治療2025 ℃(例如2℃至8℃)之溫度下穩定至少1個月，例如至少1個月、至少3個月、至少6個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或大於24個月。 在另一態樣中，調配物在小於或等於約-20℃之溫度下穩定至少6個月，例如至少6個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月、至少36個月或大於36個月。 在另一態樣中，調配物在小於或等於約-40℃之溫度下穩定至少6個月，例如至少6個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月、至少36個月或大於36個月。 在另一態樣中，調配物在小於或等於約-60℃之溫度下穩定至少6個月，例如至少6個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月、至少36個月或大於36個月。
分子治療: Taxes and tax credits
Proto 6之序列之核苷酸序列闡述於SEQ ID NO：7中。 為了產生AAV載體Proto 2S，合成100鹼基內含子插入Proto 1S載體中之FVIII-SQ序列之外顯子1與2之間。 34鹼基ApoE/C1增強子及32鹼基人類AAT啟動子遠端X區自人類AAT啟動子之上遊移除且以反向(相比於此等元件位於人類AAT啟動子上游時之定向)插入至合成內含子中。 Proto 2S之序列之核苷酸序列闡述於SEQ 分子治療 ID NO：3中。